MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421564

概要

Masp1 は、マンノース結合レクチン（MBL）関連セリンプロテアーゼである MASP-1 および MASP-3 をコードしており、これらは補体のレクチン経路を制御することで自然免疫に関与する分泌酵素です。MASP-1/3 は、補体成分の切断や、MBL やフィコリンなどのパターン認識分子との協調を通じて、オプソニン化、炎症シグナル伝達、ならびに補体と凝固関連プロセスのクロストークに影響を与えます。MASP-3 はさらに、第D因子の活性化を介した代替経路の制御にも関与しており、Masp1 は補体増幅の重要な交差点に位置づけられます。補体活性化の破綻や MASP-1/3 活性の変化は、炎症性・自己免疫性の表現型と関連し、複数の臓器系における疾患関連の組織障害機序に寄与することが示されています。

MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMasp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Masp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Masp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MASP-1/3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MASP-1/3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Masp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MASP-1/3の機能に不可欠なMasp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Masp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MASP-1/3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMASP-1/3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Masp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MASP-1/3 HDRプラスミド（m）および MASP-1/3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMasp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMasp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。