MAS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421561-ACT

O gene **Mas1** do camundongo codifica o **MAS1**, um receptor acoplado à proteína G (GPCR) de classe A, mais conhecido como receptor da **angiotensina-(1–7)** no âmbito do sistema renina–angiotensina. A sinalização via MAS1 influencia o tônus vascular e a função endotelial, além de modular a produção de óxido nítrico, a atividade de MAPK/ERK e programas inflamatórios e fibróticos a jusante. No sistema nervoso central, o MAS1 tem sido associado à excitabilidade neuronal e à plasticidade sináptica, conectando esse receptor à regulação neurovascular e a circuitos responsivos ao estresse. Alterações na atividade do eixo MAS1 estão implicadas na fisiopatologia cardiometabólica e renal, tornando o **Mas1** um ponto de interesse para estudos mecanísticos de inflamação, fibrose e remodelamento tecidual em modelos murinos.

MAS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mas1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mas1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mas1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mas1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAS1 em células tumorais com expressão de Mas1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.