MAS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401674-ACT

MAS1 (proto-oncogene MAS1, receptor acoplado à proteína G) codifica o receptor Mas, um GPCR de sete domínios transmembrana que atua como um componente-chave do braço protetor do sistema renina–angiotensina por meio da sinalização a jusante da angiotensina-(1–7). A ativação de MAS1 modula vias de segundos mensageiros dependentes de GPCR, incluindo sinalização ligada ao óxido nítrico e a prostaglandinas, com efeitos subsequentes sobre o tônus vascular, a sinalização inflamatória e a remodelação tecidual. Em células humanas, a atividade de MAS1 interage com vias que controlam a função endotelial, programas transcricionais associados à fibrose e a homeostase cardiometabólica. A expressão ou sinalização desregulada de MAS1 tem sido estudada em contextos como patologias cardiovasculares e renais, estados inflamatórios e redes de sinalização associadas ao câncer, sustentando sua relevância como alvo mecanístico para investigação de vias.

MAS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAS1 em células tumorais com expressão de MAS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.