MARCH11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416041

Visão geral

MARCH11 codifica uma ligase E3 de ubiquitina da família MARCH (Membrane-Associated RING-CH) associada à membrana, que se localiza predominantemente em membranas endossomais e secretoras, onde promove a triagem dependente de ubiquitinação de proteínas transmembrana selecionadas. Ao regular o tráfego de cargas por vias de endocitose e degradação lisossomal, a MARCH11 ajuda a moldar a composição de proteínas na superfície celular e a dinâmica das membranas intracelulares. Essa atividade relaciona a MARCH11 a um controle mais amplo das redes ubiquitina–proteassoma e endolisossomal, processos frequentemente implicados na regulação imune, nas respostas ao estresse celular e na sinalização oncogênica. A ubiquitinação desregulada e a renovação de proteínas de membrana também estão associadas a alterações na sinalização de receptores e a defeitos de proteostase relevantes para a biologia do câncer e outros contextos de doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MARCH11 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MARCH11 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MARCH11, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MARCH11 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MARCH11.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MARCH11 para a investigação da sinalização de MARCH11, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MARCH11 críticos para a função MARCH11
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MARCH11 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MARCH11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MARCH11 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MARCH11. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MARCH11 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MARCH11 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MARCH11 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MARCH11 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.