MAPKAP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404288-ACT

MAPKAP1 codifica a MAPKAP-1 (também conhecida como mSIN1), um componente essencial do complexo 2 da proteína alvo mecanística da rapamicina (mTORC2) que ajuda a determinar a montagem do complexo, a seletividade de substratos e a localização subcelular. Por meio do mTORC2, a MAPKAP-1 sustenta a fosforilação de quinases da família AGC, como AKT (Ser473), SGK e PKC, conectando a sinalização por fatores de crescimento à sobrevivência celular, ao metabolismo, à remodelação do citoesqueleto e à migração. A sinalização dependente de MAPKAP1 cruza com redes PI3K–AKT–mTOR, frequentemente alteradas na biologia do câncer e na desregulação metabólica. Alterações na expressão de MAPKAP1 ou na atividade da via têm sido associadas a mudanças na capacidade proliferativa, nas respostas ao estresse e em fenótipos invasivos em diversos contextos celulares.

MAPKAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPKAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAPKAP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPKAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPKAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAPKAP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPKAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAPKAP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAPKAP-1 em células tumorais com expressão de MAPKAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.