MAP-1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400981-ACT

O MAP1B humano codifica a proteína associada a microtúbulos 1B (MAP-1B), um regulador do citoesqueleto que se liga aos microtúbulos e promove sua estabilização e remodelamento dinâmico durante o desenvolvimento neuronal. A MAP-1B auxilia o crescimento do axônio, a orientação do cone de crescimento e a extensão de neuritos ao coordenar a comunicação cruzada entre microtúbulos e actina e processos de transporte intracelular necessários para a arquitetura celular polarizada. Sua atividade se cruza com programas de sinalização que modulam a organização do citoesqueleto, incluindo vias que regulam a neuritogênese e a maturação sináptica. Alterações na expressão ou na regulação de MAP1B têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a disfunções celulares relevantes para doenças neurológicas, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da estrutura e conectividade neuronais.

MAP-1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAP-1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAP-1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAP-1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAP-1B em células tumorais com expressão de MAP1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.