MAP-1A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403259-ACT

MAP1A codifica a proteína 1A associada a microtúbulos (MAP-1A), um arcabouço citoesquelético de alto peso molecular que estabiliza os microtúbulos e ajuda a organizar a arquitetura axonal em neurônios diferenciados. Ao conectar microtúbulos a complexos associados à actina e a adaptadores de carga, a MAP-1A sustenta a extensão de neuritos, o transporte intracelular e a manutenção sináptica, processos centrais para a polaridade neuronal e a conectividade das redes. A regulação alterada da dinâmica dos microtúbulos e do transporte axonal é uma característica recorrente na biologia de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, tornando o MAP1A um nó relevante para estudos mecanísticos de disfunção do citoesqueleto. Assim, a expressão de MAP1A e a remodelação citoesquelética dependente de MAP-1A são frequentemente investigadas em modelos de maturação neuronal, respostas ao estresse e proteostase.

MAP-1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAP-1A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAP-1A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAP-1A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAP-1A em células tumorais com expressão de MAP1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.