MAN2C1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404066

Visão geral

MAN2C1 codifica a alfa-manosidase citosólica 2C1, uma enzima-chave no catabolismo de N-glicanos livres gerados durante a renovação e o controlo de qualidade de glicoproteínas. Ao remover resíduos de manose de oligossacáridos, a MAN2C1 dá suporte ao processamento de glicanos associado à degradação dependente do RE (ERAD) e contribui para a proteostase celular e o metabolismo de hidratos de carbono. Alterações no processamento de N-glicanos e na homeostase de glicoproteínas têm sido associadas a sinalização desregulada e adaptação metabólica em múltiplos contextos de doença, tornando a MAN2C1 um ponto relevante para estudar a regulação do estado celular dependente de glicanos. Em células humanas, a perturbação de MAN2C1 pode ser usada para investigar como o processamento citosólico de glicanos influencia respostas ao stress, a comunicação cruzada lisossoma–RE e redes de sinalização derivadas de glicoproteínas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MAN2C1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MAN2C1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MAN2C1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MAN2C1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MAN2C1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MAN2C1 para a investigação da sinalização de MAN2C1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MAN2C1 críticos para a função MAN2C1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MAN2C1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MAN2C1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MAN2C1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MAN2C1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MAN2C1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MAN2C1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MAN2C1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MAN2C1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.