MAN1B1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405117-ACT

MAN1B1は、小胞体マンノシルオリゴ糖1,2-α-マンノシダーゼ（MAN1B1）をコードしており、N型糖鎖のトリミングにおける主要酵素として、誤折り畳み糖タンパク質を小胞体関連分解（ERAD）へ誘導するのに寄与します。新生のN結合型糖鎖上のマンノース残基を加工することで、MAN1B1は糖タンパク質の品質管理、プロテオスタシス、ならびに分泌経路を介した適切な輸送に貢献します。MAN1B1活性の制御異常は先天性糖鎖修飾異常症（CDG）と関連づけられており、N型糖鎖プロセシングの変化が細胞表面受容体の成熟、シグナル伝達、細胞内恒常性を乱し得ます。そのため、MAN1B1は小胞体ストレス応答、タンパク質フォールディング動態、そして糖鎖依存的な細胞生理の調節という文脈で頻繁に研究されています。

MAN1B1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAN1B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MAN1B1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAN1B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAN1B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MAN1B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAN1B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMAN1B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAN1B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMAN1B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。