MAGI-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402283

Visão geral

MAGI1 codifica a MAGI-1, uma proteína de ancoragem (scaffold) do tipo guanilato-quinase associada à membrana (MAGUK), enriquecida em junções apertadas (tight junctions) e outros locais de contacto célula–célula, onde organiza complexos multiproteicos de sinalização. Ao ligar-se a componentes juncionais e efetores de sinalização através dos domínios PDZ e WW, a MAGI-1 ajuda a coordenar a polaridade epitelial, a estabilidade das junções aderentes/apertadas e a regulação espacial de vias ligadas à remodelação do citoesqueleto e à transdução de sinal. Alterações na expressão de MAGI1 ou na sua localização nas junções têm sido associadas à disrupção da função de barreira e a programas aberrantes de migração celular, processos frequentemente estudados na biologia do cancro e na remodelação tecidual inflamatória. A MAGI-1 também é utilizada como um nó para investigar a comunicação cruzada (cross-talk) entre a arquitetura juncional e redes de sinalização responsivas a fatores de crescimento.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MAGI-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MAGI1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MAGI1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MAGI1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MAGI-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MAGI1 para a investigação da sinalização de MAGI-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MAGI1 críticos para a função MAGI-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MAGI1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MAGI-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MAGI-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MAGI1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MAGI-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MAGI-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MAGI1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MAGI1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.