MAFbx CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400908

概要

FBXO32は、ヒトの筋萎縮関連Fボックスタンパク質MAFbx（Atrogin-1とも呼ばれる）をコードしている。MAFbxは、ユビキチン依存的なプロテアソーム分解において基質特異性を与えるSCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体の構成要素である。MAFbxは異化（カタボリック）状態で強く誘導され、筋分化や筋成長の制御因子を標的とすることでプロテオスタシスの再構築に寄与する。そのため、FOXO転写因子の下流経路、IGF-1/AKTシグナル、ならびに細胞ストレス応答経路と結び付けられている。ユビキチン–プロテアソーム系の活性に関与することから、FBXO32は、悪液質に伴う萎縮や不動化に伴う筋量低下など、筋萎縮およびリモデリングの文脈で広く研究されている。FBXO32/MAFbx活性の変化は、骨格筋の適応、代謝ストレス、炎症性シグナル入力など、タンパク質回転に収束する要因を理解するうえでも重要である。

MAFbx CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFBXO32遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FBXO32内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FBXO32のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MAFbxタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MAFbxシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FBXO32欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MAFbxの機能に不可欠なFBXO32エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FBXO32ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MAFbx CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMAFbx CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FBXO32遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MAFbx HDRプラスミド（h）および MAFbx HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFBXO32ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFBXO32標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。