MafB Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-421335-ACT-2

O gene Mafb de camundongo codifica o fator de transcrição MafB, uma proteína do tipo zíper de leucina básico (bZIP) que regula a especificação de linhagens e a diferenciação terminal em macrófagos/monócitos, em células endócrinas pancreáticas e em podócitos em desenvolvimento no rim, por meio do controle específico por sequência da expressão gênica. O MafB atua em programas transcricionais e epigenéticos a jusante de vias de sinalização do desenvolvimento e do sistema imune, influenciando a polarização de macrófagos, redes responsivas a citocinas e a manutenção da estrutura dos podócitos e da integridade da barreira de filtração. A atividade desregulada de Mafb tem sido associada a alterações na homeostase imune e a defeitos na organogênese, e mudanças na expressão de MafB são frequentemente investigadas em modelos de lesão glomerular, disfunção das ilhotas associada ao diabetes e estresse inflamatório. A edição gênica de Mafb em camundongos viabiliza estudos mecanísticos dos circuitos transcricionais, das decisões de destino celular e de patologias específicas de tecidos usando modelos in vivo, células primárias e sistemas de células-tronco diferenciadas.

MafB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mafb sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MafB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mafb em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mafb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MafB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mafb nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MafB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MafB em células tumorais com expressão de Mafb silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.