MafA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401480
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MafA O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MafA, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MafA Anticorpo (F-6): sc-390491
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MafA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401480 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
MAFA codifica o fator de transcrição MafA, uma proteína do tipo “zíper de leucina” básico que se liga a elementos de reconhecimento MAF para regular programas de expressão gênica envolvidos na diferenciação celular e na transcrição responsiva a estímulos. Na biologia das ilhotas pancreáticas humanas, MafA está associado à regulação da transcrição do gene da insulina e a redes mais amplas que coordenam a sinalização responsiva à glicose, a função da via secretória e a manutenção da identidade das células endócrinas. Alterações na atividade de MAFA têm sido associadas a estados de expressão gênica desregulada em células beta e à produção prejudicada de insulina, tornando-o relevante para estudos de mecanismos relacionados ao diabetes e de respostas ao estresse nas ilhotas. Além do pâncreas, o controle transcricional dependente de MafA oferece um modelo para investigar o uso de enhancers específicos de tecido e a regulação de genes metabólicos conduzida por fatores de transcrição.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MafA (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MAFA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MAFA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MAFA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MafA.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MAFA para a investigação da sinalização de MafA, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MAFA críticos para a função MafA
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MAFA para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MafA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MafA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MAFA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MafA Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MafA (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MAFA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MAFA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.