MafA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401480

Übersicht

MAFA kodiert den Transkriptionsfaktor MafA, ein basisches Leucin-Zipper-Protein, das an MAF-Erkennungselemente bindet und so Genexpressionsprogramme reguliert, die an der zellulären Differenzierung und der stimulusabhängigen Transkription beteiligt sind. In der Biologie der menschlichen pankreatischen Langerhans-Inseln wird MafA mit der Regulation der Insulin-Gen-Transkription und mit umfassenderen Netzwerken in Verbindung gebracht, die glukoseabhängige Signalwege, die Funktion des sekretorischen Apparats und die Aufrechterhaltung der Identität endokriner Zellen koordinieren. Eine veränderte MAFA-Aktivität wurde mit fehlregulierten Genexpressionszuständen in Beta-Zellen und einer beeinträchtigten Insulinproduktion assoziiert, was sie für Studien zu diabetesbezogenen Mechanismen und Stressantworten der Inselzellen relevant macht. Über das Pankreas hinaus bietet die MafA-abhängige transkriptionelle Kontrolle ein Modell zur Untersuchung der gewebespezifischen Nutzung von Enhancern und der durch Transkriptionsfaktoren gesteuerten Regulation metabolischer Gene.

Das MafA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MAFA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MAFA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MAFA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MafA-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MAFA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MafA-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MAFA-Exone abzielen, die für die MafA-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MAFA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MafA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MafA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MAFA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MafA HDR-Plasmid (h) und MafA HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MAFA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MAFA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.