MafA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401480-ACT

O MAFA humano codifica MafA, um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico (bZIP) que se liga a elementos de reconhecimento Maf para regular programas de secreção de insulina estimulada por glicose e a maturação das células β pancreáticas. MafA integra sinais responsivos a nutrientes e ao estresse para controlar redes transcricionais envolvidas na expressão do gene da insulina, na função dos grânulos secretórios e na manutenção da identidade das células β. A atividade desregulada de MAFA tem sido associada a prejuízo da função das células β e a alterações na diferenciação endócrina, tornando-o relevante para estudos de circuitos transcricionais associados ao diabetes e da biologia das células das ilhotas. Como regulador definidor de linhagem, MafA também é usado para investigar redes regulatórias gênicas que governam decisões de destino celular endócrino e a homeostase metabólica.

MafA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAFA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MafA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAFA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAFA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MafA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAFA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MafA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MafA em células tumorais com expressão de MAFA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.