MAD2B Plasmídeo duplo de Nickase (h2): sc-404007-NIC-2

O gene humano MAD2L2 codifica a proteína MAD2B (também conhecida como REV7), uma proteína com domínio HORMA que regula a estabilidade do genoma ao participar da síntese de DNA por translesão por meio da DNA polimerase ζ e ao coordenar a tolerância a danos no DNA durante o estresse de replicação. A MAD2B também atua no complexo Shieldin, influenciando a escolha de vias no reparo de quebras de dupla fita, promovendo a junção de extremidades não homólogas e limitando a ressecção das extremidades do DNA, moldando assim as respostas celulares a insultos genotóxicos. Por meio dessas funções, o MAD2L2 afeta o controle de checkpoints, o reparo associado à replicação e o recrutamento de fatores de reparo associados à cromatina, processos frequentemente perturbados no câncer e em outras doenças ligadas a defeitos no reparo do DNA. Ferramentas de pesquisa para MAD2L2/MAD2B dão suporte a estudos mecanísticos de mutagênese, ao mapeamento de interações de letalidade sintética e à investigação funcional do viés de vias de reparo em edição gênica e em ensaios de manutenção do genoma.

MAD2B O Plasmídeo de Nickase Dupla (h2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MAD2L2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MAD2L2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MAD2L2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MAD2L2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.