Mad 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421519

概要

Mxd1（Mad1）は、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）ロイシンジッパー型の転写制御因子をコードしており、MAXと複合体を形成してコリプレッサー複合体をリクルートすることで、MYC依存的な遺伝子発現に拮抗します。このMYC–MAX–MADネットワークを介して、Mad1は細胞周期の進行、分化、細胞代謝を制御する転写抑制プログラムに寄与します。マウス系では、がん化（腫瘍性形質転換）、造血系の表現型、発生パターニングなど、MYCシグナルが破綻している状況においてMxd1活性の変化が研究されています。Mad1はクロマチン制御およびRNAポリメラーゼIIによる転写出力の調節に関与するため、増殖状態と分化状態の転写プログラムを切り分けて解析するうえで有用な結節点となります。

Mad 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMxd1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mxd1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mxd1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mad 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mad 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mxd1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mad 1の機能に不可欠なMxd1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mxd1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mad 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMad 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mxd1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mad 1 HDRプラスミド（m）および Mad 1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMxd1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMxd1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。