mAChR M1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401453-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- mAChR M1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase mAChR M1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase mAChR M1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CHRM1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:mAChR M1 Anticorpo (G-9): sc-365966
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
mAChR M1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401453-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401453-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM1 codifica o recetor muscarínico humano de acetilcolina M1 (mAChR M1), um recetor acoplado à proteína G que sinaliza principalmente através de Gq/11 para ativar a fosfolipase Cβ, aumentar o Ca²⁺ intracelular e estimular programas transcricionais dependentes de PKC. O mAChR M1 modula a excitabilidade neuronal, a plasticidade sináptica e a regulação colinérgica de circuitos corticais e hipocampais, com funções adicionais no músculo liso periférico e em tecidos secretores. A ativação a jusante de vias como MAPK/ERK e sinais associados à PI3K liga a atividade de CHRM1 a alterações na expressão génica, no metabolismo celular e na dinâmica de dessensibilização/internalização do recetor. A desregulação da sinalização colinérgica envolvendo CHRM1 tem sido estudada no contexto de fenótipos cognitivos e neuropsiquiátricos, bem como de alterações mais amplas em vias de GPCR observadas em modelos celulares relevantes para doenças.
mAChR M1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRM1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRM1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRM1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRM1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.