mAChR M1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401453-ACT

CHRM1 codifica o recetor muscarínico humano de acetilcolina M1 (mAChR M1), um recetor acoplado à proteína G que sinaliza principalmente através de Gq/11 para ativar a fosfolipase C, aumentar o Ca2+ intracelular e estimular cascatas dependentes de PKC. Os efeitos a jusante incluem a modulação da sinalização MAPK/ERK, a renovação dos fosfoinositídeos e programas de transcrição dependentes da atividade que moldam a excitabilidade neuronal e a plasticidade sináptica. O mAChR M1 também influencia a regulação colinérgica de circuitos corticais e hipocampais, bem como respostas secretoras e do músculo liso em tecidos periféricos. Alterações na expressão ou na sinalização de CHRM1 têm sido implicadas em contextos de investigação neuropsiquiátrica e neurodegenerativa, incluindo estudos sobre cognição, atenção e disfunção colinérgica.

mAChR M1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mAChR M1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mAChR M1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mAChR M1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mAChR M1 em células tumorais com expressão de CHRM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.