MACC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404253-ACT

O MACC1 humano (metastasis associated in colon cancer 1) codifica um regulador transcricional implicado no controlo da motilidade celular, do crescimento invasivo e de programas de sobrevivência. O MACC1 está intimamente associado à sinalização HGF/MET e à atividade a jusante das vias PI3K–AKT e MAPK, coordenando alterações na expressão génica que sustentam fenótipos do tipo transição epitélio–mesênquima e a remodelação da dinâmica do citoesqueleto e da adesão. Alterações na expressão de MACC1 têm sido associadas à progressão tumoral e ao comportamento metastático em múltiplas neoplasias sólidas, tornando-o um nó molecular útil para estudar redes transcricionais que ligam a deteção de fatores de crescimento à migração. Assim, a sua regulação e os seus alvos a jusante são frequentemente investigados em modelos de biologia do cancro, incluindo estudos de invasão, assinaturas transcricionais associadas à metástase e interações entre vias de sinalização.

MACC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MACC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MACC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MACC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MACC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MACC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MACC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MACC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MACC1 em células tumorais com expressão de MACC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.