M-CSF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401339-ACT

CSF1 codifica o fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), uma citocina secretada que regula a sobrevivência, a proliferação e a diferenciação de monócitos e macrófagos por meio da sinalização via CSF1R. A ativação do receptor dependente de ligante aciona as vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e JAK/STAT para regular o comprometimento da linhagem mieloide, a função fagocítica e a expressão de genes inflamatórios. Em tecidos humanos, o M-CSF contribui para a osteoclastogênese e a remodelação óssea, modulando o diálogo imune–estromal nos microambientes hematopoético e esquelético. A desregulação da sinalização CSF1/M-CSF tem sido implicada em alterações na polarização de macrófagos e nos padrões de infiltração mieloide observados em contextos inflamatórios e neoplásicos, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas de imunologia e do microambiente tumoral.

M-CSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

M-CSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de M-CSF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de M-CSF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via M-CSF em células tumorais com expressão de CSF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.