LYVE-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401446-ACT

LYVE1 codifica o receptor 1 de hialuronano do endotélio de vasos linfáticos (LYVE-1), uma glicoproteína de membrana do tipo I que se liga ao hialuronano e contribui para a identidade do endotélio linfático, para as interações com a matriz extracelular e para o tráfego de leucócitos. O LYVE-1 é comumente utilizado como marcador do endotélio linfático e também pode ser detectado em populações especializadas de macrófagos, dando suporte a estudos sobre a homeostase de fluidos teciduais e a migração de células imunes. Por meio de processos dependentes de hialuronano relacionados à adesão e à endocitose, o LYVE-1 conecta a remodelação do glicocálix à dinâmica do microambiente vascular e estromal. Padrões desregulados de expressão de LYVE1 são investigados em contextos que envolvem linfangiogênese, inflamação crônica e remodelação linfática associada a tumores, contribuindo para pesquisas mecanísticas sobre rotas associadas à metástase, sem implicar desfechos clínicos.

LYVE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LYVE1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LYVE-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LYVE1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LYVE1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LYVE-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LYVE1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LYVE-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LYVE-1 em células tumorais com expressão de LYVE1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.