Lyst Double Nickaseプラスミド (h): sc-410730-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Lyst Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Lystダブルニカースプラスミド（h）およびLystダブルニカースプラスミド（h2）は、LYSTを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Lyst Double Nickaseプラスミド (h) | sc-410730-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lyst Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-410730-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LYSTはリソソーム輸送調節因子（Lyst）をコードしており、Lystはリソソームの大きさ、運動性、そして適切なエンドリソソーム成熟に必要な小胞の分裂（フィッション）イベントを制御する大型の細胞質タンパク質です。膜動態とカーゴ（輸送物）の処理を協調させることで、Lystはオートファジー‐リソソーム機能、ファゴリソソーム活性、ならびに免疫細胞や色素細胞における調節性エキソサイトーシスに影響します。LYST機能の破綻は、リソソーム関連オルガネラの異常、抗菌応答の低下、抗原処理の変化と関連しており、リソソーム蓄積症様の表現型や免疫不全に関連する細胞生物学の観点から強い関連性があります。これらの特徴により、LYSTはヒト細胞モデルにおいて、エンドソーム‐リソソーム経路、オルガネラ恒常性、ならびにトラフィッキング依存的なシグナル伝達を解析するための有用な標的となります。
Lyst ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LYST 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LYST内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LYSTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LYSTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。