LYRM4CRISPR激活质粒(h): sc-412759-ACT

人类 LYRM4（LYR motif containing 4），又称 ISD11，是一种位于线粒体基质的蛋白质，作为 NFS1 半胱氨酸脱硫酶复合体的关键辅助因子，对铁-硫（Fe–S）簇的生物合成必不可少。通过稳定核心硫转移装置并支持依赖支架蛋白的 Fe–S 装配，LYRM4 有助于维持多种 Fe–S 依赖性酶的活性，这些酶参与氧化磷酸化、线粒体翻译以及氧化还原稳态。该通路一旦受损或功能不足，可能导致呼吸链功能下降、氧化应激升高并损害细胞能量代谢，从而将 LYRM4 相关的线粒体功能障碍与神经代谢性疾病机制联系起来。因此，LYRM4 常在线粒体质量控制、代谢适应，以及 Fe–S 簇装配缺陷的基因型—表型关系研究中被重点关注。

LYRM4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LYRM4的表达。

LYRM4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LYRM4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LYRM4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性LYRM4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LYRM4位点，并能够研究内源性位点上依赖于LYRM4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LYRM4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LYRM4通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。