Lyn Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400463-ACT

O LYN humano codifica a Lyn, uma tirosina quinase não receptora da família Src que acopla a sinalização de imunorreceptores e de receptores de citocinas a cascatas de fosforilação a jusante. A Lyn regula as vias do receptor de células B e do receptor Fc, ajustando os limiares de ativação por meio do controle coordenado da sinalização de PI3K/AKT, MAPK e NF-κB e pela modulação do recrutamento de fosfatases. Em células hematopoéticas, influencia a proliferação, a sobrevivência, a migração e as respostas imunes inatas, enquanto em outros contextos pode afetar a adesão e a dinâmica do citoesqueleto via sinalização associada a integrinas. A atividade ou expressão desregulada de LYN tem sido associada a alterações na homeostase imunológica e à reprogramação de sinalização observada em neoplasias hematológicas e em mecanismos de doenças inflamatórias.

Lyn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LYN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Lyn O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LYN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LYN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Lyn. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LYN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Lyn no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Lyn em células tumorais com expressão de LYN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.