LYAG Plasmide Double Nickase (h): sc-402385-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LYAG Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LYAG Double Nickase Plasmid (h) e il LYAG Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GAA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: LYAG Antibody (G-7): sc-373745
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LYAG Plasmide Double Nickase (h) | sc-402385-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LYAG Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402385-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **GAA** codifica l’**α-glucosidasi acida lisosomiale** (LYAG), un’idrolasi dei glicosidi necessaria per la degradazione graduale del glicogeno in glucosio all’interno del lume lisosomiale. Questo enzima sostiene l’omeostasi dei lisosomi e si integra con le vie autofagia–lisosoma prevenendo l’accumulo di glicogeno intralisosomiale, che può secondariamente alterare il traffico intracellulare e il turnover degli organelli. Un’attività alterata di GAA è associata a patologie da accumulo di glicogeno con effetti marcati nel muscolo scheletrico e cardiaco, rendendo questo locus un modello chiave per lo studio del metabolismo lisosomiale e dell’equilibrio energetico cellulare. GAA è quindi spesso studiato nel contesto della funzione lisosomiale, delle risposte allo stress e delle relazioni genotipo–fenotipo nei meccanismi delle malattie metaboliche.
LYAG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GAA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GAA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GAA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GAA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.