Lunatic Fringe Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421414

Descripción general

Lfng codifica Lunatic Fringe, una β1,3-N-acetilglucosaminiltransferasa localizada en el aparato de Golgi que modifica repeticiones tipo factor de crecimiento epidérmico (EGF) O-fucosiladas en los receptores NOTCH. Al alterar las interacciones entre receptor y ligando de Notch, Lunatic Fringe ajusta la intensidad de la señal de Notch y las dinámicas oscilatorias que gobiernan la segmentación de los somitas, la formación de límites y las decisiones de destino celular durante el desarrollo del ratón. La actividad de Lfng se asocia con el “reloj” de segmentación y con programas más amplios dependientes de Notch que influyen en el mantenimiento y la diferenciación de progenitores en múltiples tejidos. La desregulación de la modulación de LFNG/Notch es relevante para defectos de patrón del desarrollo y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar las contribuciones de la vía Notch a fenotipos asociados a enfermedad en sistemas modelo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Lunatic Fringe (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lfng en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lfng junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lfng tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Lunatic Fringe.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lfng para la investigación de la señalización de Lunatic Fringe, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lfng críticos para la función de Lunatic Fringe
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lfng para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Lunatic Fringe CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lfng. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Lunatic Fringe (m) y el plásmido HDR Lunatic Fringe (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lfng para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lfng definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.