Plasmide CRISPR/Cas9 KO Lumican (h): sc-402001

Présentation

LUM code pour la lumicane, un petit protéoglycane riche en leucine de la matrice extracellulaire qui se lie aux fibrilles de collagène et en régule l’assemblage, l’espacement et les propriétés biomécaniques. En modulant l’organisation de la matrice et l’adhérence cellule–matrice, la lumicane influence des processus tels que le remodelage tissulaire, la réparation des plaies et la signalisation stromale, qui recoupent des voies contrôlant la migration, la prolifération et les réponses inflammatoires. Des altérations de l’expression de LUM ou de sa distribution extracellulaire ont été associées à la fibrose, à des phénotypes cornéens et du tissu conjonctif, ainsi qu’au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes pathologiques liés à la matrice. La lumicane est également utilisée comme marqueur et nœud fonctionnel dans les recherches sur les états des cellules stromales et l’homéostasie de la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Lumican (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LUM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LUM, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LUM à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Lumican.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LUM pour l'étude de la signalisation de Lumican, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LUM essentiels à la fonction de Lumican
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LUM pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Lumican plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Lumican plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LUM. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Lumican plasmide HDR (h) et le Lumican (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LUM pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LUM définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.