Plásmido CRISPR de Activación (h) Lubricin: sc-402340-ACT

PRG4 codifica la lubricina, una glucoproteína secretada tipo mucina enriquecida en el líquido sinovial y en las superficies del cartílago, donde favorece la lubricación límite y protege los tejidos del daño inducido por fuerzas de cizallamiento. La lubricina contribuye a la homeostasis de la matriz extracelular al limitar la adsorción de proteínas y la adhesión celular, modulando las interacciones de condrocitos y sinoviocitos con el microambiente articular. La alteración de la expresión de PRG4 o de la composición de la lubricina se ha asociado con fenotipos de degeneración articular e inflamación sinovial, y se estudia con frecuencia en el contexto de la osteoartritis y de modelos de lesión del cartílago. Además de su papel en la biología musculoesquelética, PRG4 se utiliza como marcador de poblaciones celulares especializadas en la lubricación y para investigar cómo el estrés mecánico reconfigura programas secretorios y asociados a la matriz.

Lubricin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRG4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Lubricin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRG4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRG4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Lubricin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRG4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Lubricin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Lubricin en células tumorales con expresión de PRG4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.