Plasmide Double Nickase (h) LT-β: sc-404663-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LT-β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LT-β Double Nickase (h) et le plasmide LT-β Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LTB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LT-β Antibody (399CT9.3.4): sc-517341
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LT-β | sc-404663-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LT-β | sc-404663-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La lymphotoxine-β (LT-β), codée par le gène humain **LTB**, est une protéine membranaire de type II de la superfamille du TNF qui s’assemble avec la lymphotoxine-α pour former l’hétérotrimère **LTα1β2** et signale principalement via le récepteur de la lymphotoxine-β (**LTβR**). Cet axe active les voies NF-κB canonique et non canonique afin de réguler l’organogenèse des organes lymphoïdes, le dialogue entre stroma et cellules immunitaires, les réseaux de chimiokines et le maintien de microenvironnements tissulaires soutenant l’immunité adaptative. **LTB** contribue à l’organisation des structures lymphoïdes secondaires et aux réponses immunitaires des muqueuses, en influençant les niches de présentation de l’antigène et les programmes de trafic des leucocytes. Une signalisation LTβR dérégulée a été impliquée dans l’inflammation chronique, des phénotypes auto-immuns et le remodelage immunitaire associé aux tumeurs, faisant de **LTB** un nœud pertinent pour des études mécanistiques en immunologie et en biologie du cancer.
LT-β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LTB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LTB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LTB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LTB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.