LRWD1CRISPR激活质粒(h): sc-405341-ACT

LRWD1（leucine-rich repeats and WD repeat domain containing 1，含亮氨酸富集重复序列与WD重复结构域蛋白1），又称 ORCA，是一种与染色质相关的因子。它通过与起始点识别复合体（ORC）及复制前复合体（pre-RC）组分相互作用，参与 DNA 复制许可（replication licensing）。LRWD1 通过支持复制因子在复制起始点处的装载与稳定，促进复制起始点的正确起火以及 S 期进程，将染色质状态与基因组复制过程联系起来。LRWD1 还与异染色质的组织以及基因组稳定性的维持相关，这些过程会影响细胞周期调控和复制应激反应。在增殖失调的相关情境中已有关于 LRWD1 表达或功能改变的报道，因此它与复制时序、染色质调控以及与基因组不稳定性相关疾病的生物学研究密切相关。

LRWD1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LRWD1的表达。

LRWD1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的LRWD1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于LRWD1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性LRWD1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的LRWD1位点，并能够研究内源性位点上依赖于LRWD1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LRWD1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LRWD1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。