LRRK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404736-ACT

A LRRK1 humana (quinase serina/treonina com repetições ricas em leucina 1) é uma quinase multidomínio implicada na organização do citoesqueleto, no tráfego vesicular e na sinalização dependente de receptores por meio da fosforilação de efetores a jusante. Ela participa de vias que coordenam a dinâmica endossomal, a estabilidade dos microtúbulos e a motilidade celular, com funções descritas em células do sistema imune e na homeostase óssea. Dada sua semelhança estrutural com a LRRK2 e seu controle, mediado por quinase, de processos de tráfego, a LRRK1 é estudada no contexto da neurobiologia, da sinalização inflamatória e de fenótipos esqueléticos. A atividade desregulada de LRRK1 tem sido associada a alterações na biologia de osteoclastos e à remodelação de redes de sinalização relevantes para mecanismos de doenças degenerativas e inflamatórias.

LRRK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRRK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRRK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRRK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRRK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRRK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRRK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRRK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRRK1 em células tumorais com expressão de LRRK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.