LRP6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400844-ACT

LRP6 (proteína 6 relacionada ao receptor de lipoproteína de baixa densidade) é um correceptor transmembrana de passagem única que coopera com receptores Frizzled para transduzir a sinalização canônica Wnt/β-catenina. Após a ligação do ligante Wnt, a fosforilação de LRP6 promove a montagem do sinalossomo, a estabilização da β-catenina e programas transcricionais que controlam o destino celular, a proliferação e a manutenção de células-tronco/progenitoras. LRP6 também interage com vias que regulam o tráfego de receptores e a endocitose, moldando a amplitude e a duração das respostas a Wnt. A atividade desregulada de LRP6 e o desequilíbrio da via Wnt estão amplamente implicados em anormalidades do desenvolvimento e em processos relacionados a doenças, incluindo sinalização oncogênica, neurobiologia e regulação metabólica.

LRP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP6 em células tumorais com expressão de LRP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.