LRP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401331-ACT

LRP5 (proteína 5 relacionada ao receptor de lipoproteínas de baixa densidade) é um co-receptor transmembranar de passagem única que regula a sinalização canônica Wnt/β-catenina ao atuar em conjunto com receptores Frizzled para controlar a transdução de sinal dependente de ligante. Por meio da modulação da estabilização da β-catenina e da transcrição dependente de TCF/LEF, o LRP5 influencia a diferenciação de osteoblastos, o acúmulo de massa óssea e programas mais amplos que governam o destino celular, a proliferação e a homeostase tecidual. O LRP5 também participa de interações cruzadas com antagonistas extracelulares, como DKK e esclerostina, que ajustam a sensibilidade da via Wnt na superfície celular. Alterações genéticas e funcionais do LRP5 estão associadas a distúrbios de densidade óssea e do desenvolvimento vascular ocular, tornando-o um nó-chave para o estudo de fenótipos impulsionados por Wnt em células humanas.

LRP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP5 em células tumorais com expressão de LRP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.