LRP1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404088-ACT

LRP1B (proteína relacionada ao receptor de LDL 1B) é um grande receptor endocítico da família dos receptores de LDL que participa da internalização mediada por receptor de ligantes extracelulares e da modulação da disponibilidade, na superfície celular, de proteases e fatores de crescimento. Por meio de seus efeitos sobre a endocitose e a renovação de proteínas de membrana, o LRP1B pode influenciar o manejo de lipídios, a remodelação da matriz extracelular e vias de sinalização ligadas à adesão e migração celular. Alterações na expressão de LRP1B ou perturbações genômicas foram relatadas em diversos conjuntos de dados associados ao câncer e são estudadas em relação à evolução tumoral, invasão e características relacionadas ao sistema imune, com interesse adicional em biologia neuronal e cardiometabólica. Como resultado, o LRP1B é frequentemente investigado como regulador de processos de captação celular e de sinalização do microambiente relevantes para mecanismos de doença.

LRP1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRP1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRP1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRP1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRP1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP1B em células tumorais com expressão de LRP1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.