LRF/Pokemon Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402016

Panoramica

ZBTB7A codifica il fattore di trascrizione LRF/Pokemon (noto anche come FBI-1), una proteina BTB/POZ e a dita di zinco che si lega a elementi di DNA ricchi in GC per modulare programmi di espressione genica che controllano le decisioni sul destino cellulare. Partecipa alla repressione trascrizionale dipendente dalla cromatina e interagisce con vie che regolano proliferazione, differenziamento e impegno di linea, inclusa la regolazione, in modo dipendente dal contesto, di geni del metabolismo e della risposta allo stress. LRF/Pokemon è collegato all’ematopoiesi e allo sviluppo delle cellule immunitarie ed è stato studiato per i suoi effetti sulla maturazione eritroide e sul differenziamento linfoide. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di ZBTB7A sono state associate a reti trascrizionali deregolate nel cancro e in altri disturbi proliferativi, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici delle vie oncogeniche e dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRF/Pokemon (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZBTB7A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZBTB7A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZBTB7A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRF/Pokemon.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZBTB7A per lo studio della segnalazione di LRF/Pokemon, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZBTB7A critici per la funzione di LRF/Pokemon
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZBTB7A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZBTB7A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRF/Pokemon Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRF/Pokemon (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZBTB7A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZBTB7A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.