LOXL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401021-ACT

A LOXL2 humana (lysyl oxidase-like 2) é uma amina oxidase secretada e dependente de cobre que catalisa a desaminação oxidativa de resíduos de lisina no colágeno e na elastina, promovendo a reticulação covalente e a maturação da matriz extracelular (MEC). Por meio da remodelação da MEC, a LOXL2 regula a adesão e a migração celular, bem como a mecanotransdução, conectando-se a vias associadas à transição epitélio–mesênquima, à fibrose tecidual e à remodelação estromal. A expressão e a atividade desreguladas de LOXL2 são frequentemente associadas a alterações na rigidez da matriz e a fenótipos invasivos na biologia do câncer, além de microambientes fibróticos e inflamatórios. Essas funções tornam a LOXL2 um alvo útil para estudar a regulação do comportamento celular dirigida pela MEC, processos relacionados à metástase e a sinalização do microambiente.

LOXL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LOXL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LOXL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LOXL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LOXL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LOXL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LOXL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LOXL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LOXL2 em células tumorais com expressão de LOXL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.