LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423191
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- LOK O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico LOK, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:LOK Anticorpo (D-6): sc-398083
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423191 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Stk10 codifica a lymphocyte-oriented kinase (LOK), uma quinase de serina/treonina da família STE20 que, em camundongos, conecta a sinalização a montante à remodelação do citoesqueleto e ao comportamento de células imunes. A LOK participa de vias que regulam a dinâmica da actina, a polaridade celular e a adesão, influenciando processos como a migração de linfócitos, a organização da sinapse imunológica e a responsividade a sinais de ativação. Em contextos hematopoéticos, alterações na sinalização de STK10/LOK têm sido associadas a desregulação da homeostase imune e a fenótipos anômalos de motilidade celular, tornando-a relevante para estudos de biologia ligada à inflamação. A função da LOK também se cruza com checkpoints controlados por quinases que moldam programas de proliferação e sobrevivência, apoiando trabalhos mecanísticos sobre redes de sinalização em estados celulares normais e relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO LOK (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Stk10 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Stk10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Stk10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína LOK.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Stk10 para a investigação da sinalização de LOK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Stk10 críticos para a função LOK
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Stk10 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Stk10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo LOK Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR LOK (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Stk10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Stk10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.