LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405859

Visão geral

A quinase de serina/treonina 10 (STK10), também conhecida como quinase orientada para linfócitos (LOK), é uma quinase da família STE20 que regula a organização do citoesqueleto e a polaridade celular por meio de eventos de fosforilação que influenciam a dinâmica da actina e a função das proteínas ERM (ezrina–radixina–moesina). Em células imunes, a LOK contribui para a adesão e a migração de linfócitos e para a arquitetura da sinapse imunológica, conectando a sinalização de receptores à remodelação da actina cortical. A atividade da STK10 interage com vias dependentes de GTPases da família Rho e com redes de sinalização mais amplas que coordenam a motilidade e o tráfego tecidual. A desregulação da sinalização do citoesqueleto e o controle aberrante, mediado por quinases, do movimento celular têm sido associados a disfunção imune e a fenótipos relacionados ao câncer, tornando a STK10 um alvo relevante para estudos mecanísticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO LOK (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene STK10 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do STK10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do STK10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína LOK.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de STK10 para a investigação da sinalização de LOK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) STK10 críticos para a função LOK
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos STK10 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo LOK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus STK10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo LOK Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR LOK (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia STK10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo STK10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.