LOC285636 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415435-ACT

C5orf51（LOC285636）は、現在のデータベースでは機能注釈が限られている、十分に解明されていないヒトの遺伝子座であり、低発現量のタンパク質をコードしている可能性が示唆されています。転写産物レベルでの新たな観察からは、細胞種や状況に依存した発現が示されており、基本的なハウスキーピング代謝というよりも、細胞状態を形作る調節ネットワークにおける役割が考えられます。未同定のオープンリーディングフレームにしばしば見られるように、多様な疾患コンテキストのデータセットにおいて発現変動が報告されており、遺伝子調節機構や表現型との関連を解明するための機序研究の優先対象として位置づけられます。LOC285636の機能を定義することは、増殖、ストレス応答、細胞分化プログラムに関わる上流の転写制御および下流の経路影響のマッピングに役立ちます。

LOC285636 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C5orf51の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LOC285636 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C5orf51 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC5orf51転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LOC285636の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC5orf51遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLOC285636依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC5orf51発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLOC285636経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。