LNX3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403866-ACT

PDZRN3 codifica a LNX3, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING e com múltiplos domínios PDZ, que coordena interações proteína–proteína e a degradação dependente de ubiquitina de componentes de sinalização. Por meio da montagem de complexos mediada por proteínas “scaffold” e da ubiquitinação, a LNX3 está implicada na regulação do tráfego de receptores e de programas transcricionais a jusante que moldam a polaridade celular, a diferenciação e a remodelação tecidual. Conexões relatadas com vias que controlam a sinalização de fatores de crescimento e Wnt/polaridade celular planar destacam papéis no padrão de desenvolvimento e na organização do citoesqueleto. A expressão desregulada de PDZRN3/LNX3 tem sido associada a estados proliferativos e de diferenciação alterados em múltiplos contextos relevantes para doenças, apoiando seu uso como um nó mecanístico em estudos focados em vias.

LNX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDZRN3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LNX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDZRN3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDZRN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LNX3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDZRN3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LNX3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LNX3 em células tumorais com expressão de PDZRN3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.