Plásmido CRISPR de Activación (h) LMP2: sc-401615-ACT

PSMB9 codifica la subunidad catalítica del inmunoproteasoma LMP2 (β1i), un componente clave de los proteasomas inducibles por interferón gamma que remodelan la especificidad proteolítica para generar péptidos antigénicos destinados a su presentación por el MHC de clase I. Al regular el recambio de proteínas y la composición del inmunopeptidoma, LMP2 influye en la señalización inmunitaria innata y adaptativa, las respuestas inflamatorias y la adaptación al estrés celular. La actividad alterada de PSMB9 se ha vinculado con una presentación antigénica desregulada y con vías aberrantes impulsadas por citocinas, relevantes para la autoinmunidad, la inflamación crónica y los mecanismos de evasión inmunitaria observados en la biología del cáncer. Como parte del sistema ubiquitina–proteasoma en sentido amplio, LMP2 ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar el crosstalk entre la proteostasis y el sistema inmunitario, así como las redes de genes estimulados por interferón.

LMP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PSMB9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LMP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PSMB9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PSMB9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LMP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PSMB9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LMP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LMP2 en células tumorales con expresión de PSMB9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.