LIV-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403294-ACT

SLC39A6 codifica o LIV-1 (ZIP6), um transportador de zinco da membrana plasmática que regula o influxo celular de zinco e ajuda a manter a homeostase de metais. A sinalização de zinco dependente de LIV-1 influencia vias que controlam proliferação, diferenciação e motilidade, incluindo programas associados à EMT e redes de quinases e de regulação transcricional a jusante. Alterações na expressão de SLC39A6 foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e estão ligadas a mudanças em fenótipos de invasão e em sinalização responsiva a hormônios, tornando-o um nó útil para estudar transições de estado celular reguladas por metais. Em modelos de células humanas, o LIV-1 oferece uma base mecanística para investigar como a disponibilidade de zinco remodela os circuitos transcricionais e as respostas adaptativas ao estresse.

LIV-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC39A6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIV-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC39A6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC39A6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIV-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC39A6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIV-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIV-1 em células tumorais com expressão de SLC39A6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.