LITAF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404337-ACT

LITAF (fator de TNF induzido por lipopolissacarídeo) é um regulador transcricional implicado na sinalização imune inata e na expressão de genes inflamatórios, incluindo a modulação do TNF e de outros programas responsivos a citocinas. A proteína interage com vias de detecção de estresse e patógenos e contribui para processos de tráfego endossomal/lisossomal que influenciam a renovação de receptores e os resultados de sinalização a jusante. Alterações na atividade de LITAF têm sido associadas a inflamação desregulada e a respostas celulares ao estresse, e perturbações genéticas foram vinculadas a fenótipos neuropáticos e relacionados ao sistema imune. Essas características fazem de LITAF um alvo útil para estudar o controle transcricional de redes de citocinas, a interconexão entre tráfego de membranas e inflamação e a regulação dependente do contexto da homeostase imune.

LITAF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LITAF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LITAF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LITAF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LITAF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LITAF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LITAF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LITAF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LITAF em células tumorais com expressão de LITAF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.