LIN-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418584-ACT

O gene humano **LIN9** codifica a proteína **LIN-9**, um componente central da rede regulatória **MuvB/DREAM** que coordena a expressão de genes do ciclo celular, alternando entre a repressão transcricional em quiescência e a ativação durante a fase S e a mitose. A LIN-9 ajuda a montar complexos com fatores associados a **E2F** e **B-Myb/FOXM1** para regular promotores de genes que controlam a replicação do DNA, a dinâmica do fuso mitótico e a citocinese. Por meio dessas interações, a LIN-9 contribui para a estabilidade do genoma e para a progressão ordenada do ciclo celular, tornando-se relevante para estudos de desregulação proliferativa e instabilidade cromossômica na biologia do câncer. Programas transcricionais dependentes de LIN9 também são usados para investigar checkpoints e respostas ao estresse que influenciam a proliferação em diversos tipos celulares.

LIN-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LIN9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIN-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LIN9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LIN9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIN-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LIN9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIN-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIN-9 em células tumorais com expressão de LIN9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.