Limkain b1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411308-ACT

KIAA0430 codifica a Limkain b1, uma proteína humana implicada na organização do citoesqueleto e em processos associados à actina que moldam a morfologia, a adesão e a motilidade celulares. Estudos das proteínas da família Limkain sugerem ligações a vias de sinalização que acoplam a dinâmica da membrana à remodelação da actina, sustentando alterações coordenadas na arquitetura celular. A regulação alterada das redes do citoesqueleto de actina está frequentemente associada a fenótipos de proliferação, migração e invasão desregulados no cancro e a conectividade neuronal comprometida em contextos do neurodesenvolvimento. Caracterizar a expressão e a função da Limkain b1 pode ajudar a clarificar como o controlo do citoesqueleto se articula com programas transcricionais e de sinalização mais amplos, relevantes para transições de estado celular associadas a doenças.

Limkain b1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIAA0430 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Limkain b1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIAA0430 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIAA0430, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Limkain b1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIAA0430 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Limkain b1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Limkain b1 em células tumorais com expressão de KIAA0430 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.