LIGHT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424539
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- LIGHT O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico LIGHT, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
LIGHT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424539 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene murino **Tnfsf14** codifica **LIGHT (TNFSF14)**, uma citocina da superfamília TNF que atua como ligante, tanto na forma ligada à membrana quanto solúvel, para **HVEM (TNFRSF14)** e **LTβR**, coordenando sinalização bidirecional entre os compartimentos imune e estromal. A ligação de LIGHT ativa as vias de **NF-κB** e **MAPK** para modular a coestimulação de células T, a função de células dendríticas e a organização do tecido linfoide, com efeitos a jusante na produção de citocinas e no tráfego de leucócitos. A desregulação da sinalização de LIGHT tem sido implicada em fenótipos inflamatórios e autoimunes, bem como em interações tumor–sistema imune, tornando-a um ponto útil para estudar a regulação imune e a inflamação tecidual em modelos murinos. Além disso, **Tnfsf14** contribui para respostas de barreira e vasculares por meio de programas dependentes de **LTβR** que moldam microambientes locais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO LIGHT (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tnfsf14 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tnfsf14, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tnfsf14 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína LIGHT.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tnfsf14 para a investigação da sinalização de LIGHT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tnfsf14 críticos para a função LIGHT
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tnfsf14 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo LIGHT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo LIGHT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tnfsf14. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo LIGHT Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR LIGHT (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tnfsf14 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tnfsf14 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.