LIF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401120-ACT

O fator inibitório de leucemia humano (LIF) é uma citocina pleiotrópica da família da IL-6 que sinaliza por meio do complexo receptor LIFR/gp130 para ativar as vias JAK/STAT3, MAPK/ERK e PI3K/AKT. O LIF regula decisões de destino celular, incluindo autorrenovação de células-tronco, diferenciação, sobrevivência e comunicação cruzada inflamatória, com efeitos dependentes do contexto em tecidos embrionários e adultos. A desregulação da sinalização de LIF tem sido implicada em interações tumor–estroma, modulação imune, remodelamento associado à fibrose e biologia reprodutiva, tornando-o um nó útil para investigação de vias em modelos relevantes para doenças. Como fator secretado, o LIF também apoia estudos de sinalização parácrina, redes extracelulares de citocinas e programas transcricionais a jusante de STAT3.

LIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LIF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LIF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LIF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LIF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIF em células tumorais com expressão de LIF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.