LHR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400750-NIC

LHCGR codifica o recetor da hormona luteinizante/gonadotrofina coriónica (LHR), um GPCR responsivo a gonadotrofinas que regula a endocrinologia reprodutiva em células esteroidogénicas. A ligação do ligando ativa a via de sinalização Gs/adenilil ciclase, elevando o cAMP e estimulando programas transcricionais dependentes de PKA que controlam a biossíntese de esteroides, a ovulação e a produção de androgénios pelas células de Leydig, com acoplamento adicional às vias PLC/PKC e MAPK, que modulam a proliferação e a diferenciação. A sinalização do LHR integra-se com redes de desenvolvimento e metabolismo gonadais, influenciando a expressão de enzimas esteroidogénicas como a STAR e membros da família CYP. A desregulação ou variação genética em LHCGR tem sido associada a distúrbios do desenvolvimento sexual, fenótipos de fertilidade e fisiopatologia ovárica e testicular dependente de hormonas, relevantes para modelos de investigação mecanística.

LHR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus LHCGR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de LHCGR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função LHCGR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com LHCGR interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.