LHR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400750-ACT

LHCGR codifica o receptor humano do hormônio luteinizante/gonadotrofina coriônica (LHR), um receptor acoplado à proteína G (GPCR) do tipo rodopsina que se liga ao hormônio luteinizante e à gonadotrofina coriônica para regular a esteroidogênese gonadal e a função dos tecidos reprodutivos. Após a ligação do ligante, o LHR ativa principalmente a via de sinalização Gαs–adenilil ciclase–cAMP/PKA e pode interagir com as vias MAPK/ERK e PI3K/AKT para modular programas transcricionais, diferenciação celular e feedback endócrino. A desregulação da expressão ou da sinalização de LHCGR tem sido associada a fenótipos endócrinos reprodutivos, incluindo comprometimento da função gonadal e alterações na biossíntese de hormônios esteroides. Na pesquisa biomédica, LHCGR é utilizado para investigar a dinâmica de sinalização de GPCRs, a regulação gênica induzida por gonadotrofinas e o crosstalk entre vias relevante para a biologia reprodutiva e sistemas responsivos a hormônios.

LHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LHCGR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LHCGR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LHCGR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LHR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LHCGR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LHR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LHR em células tumorais com expressão de LHCGR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.