LGR5 Double Nickase Plasmid (h): sc-400726-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LGR5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LGR5 Double-Nickase-Plasmid (h) und LGR5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LGR5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LGR5: sc-517661
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LGR5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400726-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LGR5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400726-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LGR5 (leucinreiche Repeat-enthaltender G‑Protein-gekoppelter Rezeptor 5) ist ein WNT/β‑Catenin-antwortender Zelloberflächenrezeptor, der weithin als Marker für adulte Stamm- und Vorläuferzellpopulationen in epithelialen Geweben verwendet wird. Im Zusammenspiel mit R‑Spondinen und Frizzled/LRP-Rezeptoren verstärkt LGR5 die kanonische WNT-Signalübertragung, um Selbsterneuerung, die Krypten‑Zotten-Homöostase und die Linienfestlegung zu regulieren. Eine Fehlregulation der LGR5-assoziierten Signalwege wurde mit veränderten stammzellähnlichen Zuständen, aberranter Proliferation und Veränderungen von Differenzierungsprogrammen in verschiedenen Kontexten solider Tumoren in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen LGR5 zu einem nützlichen Ziel, um Stammzelldynamik, Nischensignale und die Modulation des WNT-Signalwegs in humanen Zellmodellen zu untersuchen.
LGR5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LGR5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LGR5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LGR5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LGR5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.